Peptide處理與保存
承蒙惠顧,感謝您睿智選擇。希望曜鴻高品質Peptide能對貴實驗室有所助益。以下提供一些關於Peptide的保存與溶解方法與建議,不過最主要,越快進行溶解使用越好。另外,當您遇到問題時,不用害怕,一個方法不行,就試下一個,最後您可能會發現,其實沒有想像中的困難!
1、Peptide 的保存
收到Peptide後,敬請保存在低溫並注意盡量避光,最好冷藏在4℃或更冷的環境。一般乾燥狀態的 Peptide 可於室溫下保存幾天至一星期,如果想要存放更久的話,就必須要放在-20℃的冷藏。另須注意,汙染和濕氣(潮濕)也會影響到固體的Peptides,會讓它產生不穩定的狀態。因此當我們要使用Peptides時,首先,先從冷藏/凍冰箱拿出裝有Peptides的容器,先不要打開它的蓋子,待其與室內常溫平衡後,才把容器打開。這樣才可以減少Peptides的表層吸收到空氣中的濕氣。再來,即可取出您所需要的量。之後,再把它蓋回並密封。最好將Peptides放在充有乾燥氮氣的環境。關於如何將Peptide置入充有乾燥氮氣的環境呢? 將乾燥氮氣以細管輕輕的吹到容器裡,請小心不要太大力,可能將粉末也吹出來。都處理好後(將空氣以氮氣置換後),盡速蓋上瓶蓋,儲存至冷藏或冷凍。
2、Peptide 溶液的保存方法
有些Peptide 溶液不可以長期保存,尤其是氨基酸序列中含有C, M, W, N和Q的Peptide 溶液。如果您想要延長它的保存,請加入pH5到6的buffers,然後放到-20℃以下的冷藏中。有一些冷藏系統不適用,請小心選擇。
3、Peptide的溶解度預測
不能在一般生物分析實驗所需Buffer 中溶解的Peptides是不實用的,所以能有效溶解的Peptides顯得相當重要。在某種程度上,其實Peptide溶解困難度可以被預先分析預估。如果我們能在合成Peptide之前有效規劃其胺基酸序列與長度,我們就可以降低溶解困難度(細節可與曜鴻生技討論)。另外Peptides 極性的小小變化也會對它的溶解值造成相當大的幫助。(如果是非極性的Peptides以非極性Buffer處理,就比較可溶。同理,含極性胺基酸高的Peptides就會比較容易溶解在極性的Buffer。)
4、Peptide的容器
裝填Peptides的容器,須完全乾淨不受污染,無菌,不會受其他化學成分影響的容器。以透明可看穿的玻璃材質為佳。至於容器大小,以Peptides量的大小為主。如果您想用塑膠的容器,最好是選擇透明,可抵抗溶劑 (e.g. polystyrene);或是有化學抵抗半透明的塑膠容器(e.g. polypropylene)。當我們在運送Peptides時,我們會用polypropylene tubes,因為它比較不容易破。而且它還抵抗溶劑,亦可當Peptides重新融解的器皿。當然,若您須目視Peptides,尚需要轉換至透明玻璃容器。
5、單一條Peptide的溶解方法
現今尚無一理想溶劑可以用來溶解所有Peptides,所以為了溶解比較難溶的Peptide,您也可以嘗試使用一些強的溶劑。我們提供了下列的Peptide溶解的方法,希望對您有所幫助。
Step 1. 將Peptide溶解在ddH2O 或 0.1%醋酸(acetic acid),這樣可配製高濃度的stock solution。這個stock solution可以用於與buffer aqueous溶解。再來,如果Peptides溶解到只剩下一點殘留的塊狀物的話,可以用超音波震盪加攪拌試著溶解。目的為增加其溶解度。超音波震盪之後,如仍有凝膠物,糊糊東西在表面,表示它尚未溶解,反而懸浮在液面。
Step 2. 如果Peptides還是未能溶解,可參考它的氨基酸序列。
Step 3. 如果Peptides還是未能溶解,可加入DMF或DMFO。
6、溶解多條Peptides的方法
以上的方法大都是針對單Peptide,所以有時這些方法並不適用與多Peptides。以下是對於多Peptides的一些方法。
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加入0.1%的acetic acid/water,讓它變成濃度是1-5mg/mL的solution,然後再超音波震盪。
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如果還有其他的未完全分解的Peptide,可以多加一些純acetic acid,把它的濃度提升至10%(v/v),再超音波震盪。
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還有殘餘的話,再加一些純acetic acid,把它的濃度提升至20%(v/v),再超音波震盪。
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對於還有其他剩下的殘餘,用真空冷凍乾燥處理,移去多餘的acetic acid/water。再加入DNF,直到Peptide完全分解。然後,稀釋它,直到變成10%(v/v) DMF。過程中,如果有沉澱,就停止加水,反加DNF,分解它。
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用最有效的溶劑,稀釋您的Peptides。
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加入DMF後,Solution 會被lyophilised變成好保存的型態。
以上為較常用的方法,當然還有很多種其他方法,當您選擇方法時,主要參考您的assay system,buffer 或 peptide concentration。
7、Peptide的化學變化
Peptides的穩定性變化很大,因此要小心保存,如果沒有會造成一些化學變化。
1.氧化
一些胺基酸,遇到空氣比較容易氧化,因此我們可以利用degassed 或 deoxygenated 的溶劑或溶液。另外pH值也要注意到,通常弱酸或中性比較不會讓Peptides氧化。
以0.1M ammonium bicarbonate溶解Peptides,然後放在常溫下4小時。再來lyophilise您的溶液,然後用nitrogen冷藏。這樣可以防止再次的氧化。
溶解您的Peptides在10% acetic acid 在 water中,然後再加上N-methylmercaptoacetamide直到 10%(v/v)。incubate在37℃的冷藏,24或更多小時。之後再lyophilise 或de- salt就完成了。
2. 其他的化學變化
Peptides有比較多較容易產生化學變化的連結,它可以在酸或鹼的情況下發生。還有一定要放在冷的地方。
另外您也可以嘗試用預篩的方式,將您無法分解的Peptides篩出來。但請注意您篩子的選擇,最好是有溶劑抵抗的和低peptide-binding properties。
*中文版為部份翻譯,詳細資料懇請參閱原文內容,謝謝您。